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作者:下载网址            发布时间:2020-08-27
  摘要:诃子又名诃黎、诃黎勒、随风子,为使君子科植物的果实。诃子作为中药在中医临床上广泛使用,用于油脂抗氧化方面的研究在国内已见有专门报道。诃子果实中含丰富的鞣质和多元酚类,约为30%~40%已有文献报道,鞣质和多元酚类具有较好的抗氧化性。

目的建立诃子提取物中鞣花酸含量的高效下载色谱(HPLC)下载方法。方法色谱条件Shim-packCLC-ODS色谱柱(150mm×6mm,5μm),柱温30℃,用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(体积比30∶2∶68)作为流动相,检测波长为254nm。结果鞣花酸在0.268~5.36μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率为98.42%,RSD为1.13%(n=5)。结论该方法快速、简便、准确,可用于诃子中鞣花酸的含量下载。

【关键词】诃子;鞣花酸;高效下载色谱

鞣花酸(2,3,7,8-tetrahydroxybenzopyrano[5,4,3-cde]benzopyran-5,10-dione)是一种植物多酚类化合物[5](如图1),为诃子中主要的活性成分之一,广泛存在于各种自然的软果、坚果等植物果实中。它对化学物质诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用,它能与人体内有害自由基结合,具有强力祛癌变功效,可以抗衰老、增加机体免疫,还具有降压、镇静作用,对多种细菌、病毒有很好的抑制作用[6]。因此鞣花酸有“克癌之星”“致癌物清除剂”之美称。从机理上讲,鞣花酸是一种抗氧化剂[7],它可作为保健食品添加剂,研究、开发本品具有较高的经济价值和广泛的应用范围。

本实验建立了HPLC法下载诃子中鞣花酸含量的方法,并对文献报道的多种色谱条件进行了比较[8~10],表明本文方法精确可行。

1仪器与试剂

优发岛津SPD-10AT高效下载色谱仪;SPD-10Avp检测器;SIL-10AP自动进样器;超纯水器(arium611UF,Sartorius);超声波清洗器(AS3120A,天津瑞森特);电子天平(AdventurerTM,AR2140,上海奥豪斯公司);旋转蒸发仪(R-200,瑞士Buchi)。岛津UV2100型,甲醇为色谱纯;实验用水为超纯水,蒸馏水自制,其它试剂均为国产分析纯试剂。

鞣花酸对照品(购自购自成都普瑞法科技开发有限公司),纯度≥98%。诃子(产自云南临仓和缅甸)。

2方法

2.1色谱条件色谱柱为岛津Shim-packCLC-ODS柱(150mm×6mm,5μm),柱温30℃,用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(体积比34∶2∶64)作为流动相,检测波长为254nm。

2.2对照品溶液的制备精密称取鞣花酸对照品6.7mg,加甲醇25ml制成每毫升含0.268mg的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备精密称取诃子粉(均过60目筛)约1g,置于100ml具塞三角烧瓶中,加60%乙醇25ml,超声提取60min,过滤,用60%洗涤滤渣,合并滤液和洗涤液,50℃旋转蒸干,加甲醇定容至10ml,以0.45μm微孔滤膜滤过,滤液作为样品供试液,进样10μl。

2.4标准曲线制备精密吸取对照品溶液1.0,2.0,5.0,10.0,15.0,20.0μl进样,下载峰面积,并以色谱峰峰面积(A)对对照品的量(m)回归(包括原点),得回归方程为A=7.5777E 06m 9.6700E 05(R=0.9999)。鞣花酸0.268~5.36μg范围内,线性关系良好。

2.5精密度和样品重复性实验重复进对照品溶液10μl/次,测得鞣花酸峰面积相对标准偏差RSD=0.9%(n=6);对同一样品按拟定的方法作多次下载,其含量相对标准偏差RSD=2.1%(n=5)。

a-鞣花酸对照品b-诃子样品

2.6回收率实验采用加样回收法取已知量的诃子,分别添加一定量的鞣花酸对照品,按拟定的方法下载,结果平均回收率为98.42%,RSD为1.13%(n=5)。

2.7样品下载按上述“2.3”项样品液制备方法下载云南产诃子和缅甸产诃子中鞣花酸的含量,云南产诃子和缅甸产诃子的鞣花酸含量分别为0.573mg/g(RSD=3.4%)和0.567mg/g(RSD=4.2%)。

3结果

3.1最佳检测波长的选择对鞣花酸对照品甲醇溶液的紫外-可见光(200~600nm)扫描发现,鞣花酸在254nm有最大吸收,故选择254nm为其检测波长。

3.2流动相的选择实验发现,若仅用甲醇和水作流动相,很难实现多酚物质的分离。通过改变流动相的pH值来提高分离度,由于pH太低会损坏色谱柱,导致柱效降低。本实验选用磷酸和磷酸盐缓冲体系,醋酸乙酯和甲醇作流动相,流动相中加入了一定量的磷酸,对鞣花酸起离子抑制作用,使其与杂质峰达到很好地分离。

3.3流速对分离度的影响在一定流速范围内,流速减少,柱效提高,分离度变大。但若流速过慢,分析时间延长,纵向扩散的影响变大,柱效降低。虽然提高流速可缩短分析时间,但若流速过高,物质来不及分离就被洗出,分离效果差,而且会损坏泵头和色谱柱。因此,流速对分离度的影响也很大。最终确定流速为1.0ml·min-1时,出峰时间和分离效果均较满意。

4结论

本法操作简单,结果准确,重复性好,可作为该产品的质量控制方法。由于诃子提取物具有良好的药用价值,对多个系统疾病具有良好的治疗作用,具有较好的开发前景。本研究采用HPLC法下载诃子中鞣花酸含量,方法快速、简便、准确,下载结果可靠,为诃子在食品开发及医药应用上提供科学依据。


(来源:中国地址仪器网)

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